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培養基除菌過濾和上清廢液抽吸兩項操作是細胞培養中不可少的兩個環節,一個在實驗前期準備,另一個則是后期處理。培養基除菌過濾是一種物理除菌方法,利用微孔濾膜,通常孔徑為0.22µm,將配置好的液體培養基中的細菌、真菌等微生物截留,從而獲得無菌溶液的過程。這是一種在不破壞熱敏感成分的前提下,實現培養基或試劑的無菌化的方法。高壓蒸汽滅菌會破壞培養基中的維生素、生長因子、激素等活性成分,因此除菌過濾是制備培養基的標準方法。而培養基上清廢液抽吸是指在細胞培養過程中,移除培養容器(如培養皿、培養瓶、孔板)中舊的、已耗盡的培養基、細胞代謝廢物或實驗處理液的操作。為細胞更換新鮮培養基、進行洗滌步驟(如PBS清洗)或收取特定組分(如上清、細胞)做準備。是維持細胞健康、進行實驗干預的常規操作。
在許多實驗室中,為了進行這兩項操作,往往需要準備兩套不同設備分別進行這兩項操作,這樣會增加設備購置個管理成本。在具體操作時,無論是除菌過濾還是上清廢液抽吸,其本質都是利用真空泵產生的負壓吸引力。區別在于,除菌過濾是通過負壓(真空泵)或正壓(注射器推注、蠕動泵)驅動液體通過濾膜,一般實驗室由于過濾量不多,常用的是連接真空泵的負壓抽濾裝置;而上清廢液抽吸則是將吸頭置于液面處或緊貼容器側壁底部,利用負壓緩慢吸走液體。對于貼壁細胞,可稍微傾斜容器,使液體集中在一角后再抽吸。所以通過精巧的設計,可實現使用一臺負壓真空系統,同時實現這兩項操作,比如圣斯特的L100SAF培養基除菌過濾和上清廢液抽吸兩用真空系統,下面我們來介紹具體操作使用,幫助客戶進一步了解此類設備。

●除菌過濾的操作:
1.取出47或50 mm的濾膜放到過濾轉接座濾膜支撐片上,注意使其位于支撐片中間。
2.將過濾杯放置于濾膜的上方,再以順時針方向輕輕的旋緊,讓過濾杯卡住過濾基座。
3.主機機體請使用75%的酒精擦拭消毒滅菌;過濾器、藍蓋試劑瓶和泵管請使用121度高溫高壓濕熱滅菌,不可以使用消毒劑、有機溶劑或者其他清潔劑浸泡、清洗,會造成部件的腐蝕開裂。
4.如果使用的是普通濾膜,建議裝入瓶頂式真空過濾器后再一起滅菌;如果使用的是已滅菌無菌包裝的濾膜,可以在過濾器滅菌后再裝入。
5.將過濾連接座接到GL45標準螺紋口玻璃試劑瓶上,順時針方向旋緊。
6.將真空過濾瓶插入放置槽內,用泵管連接阻水保護器和過濾連接座側邊泵管接口。
7.將要液體倒入過濾杯中,過濾過程中需要接觸的空氣是干凈無菌的,請在漏斗蓋上插上0.2 µm的過濾器,并將漏斗蓋蓋到過濾杯上,是空氣通過濾器再推動濾液。
8.用泵管連接抽濾泵和過濾基座接口,啟動主機開始過濾,過濾完后將關機。
9.將過濾杯從轉接過濾座上以反時針方向旋開,請依實驗程序進一步處理濾膜。
10.再依實驗程序進行收集,分析或處理瓶內的溶液。
11.完成過濾后,請將過濾器以清水沖干凈,擦干后保存。

●真空集液瓶的鏈接和操作:
1.將導流延長管接在兩孔吸液蓋內側,并按照螺紋的方向擰在試劑瓶上,組成完整的真空吸液瓶,組合完成將吸液瓶插入主機的放置槽內。
2.連接真空泵管和吸液管:取出真空泵管連接阻水保護器和兩孔吸液蓋的吸氣端(AIR);取出吸液管(2米長一根)連結手持操作器和兩孔吸液蓋的液體端(LIQ)。
3.完成吸液瓶的組裝后,可以參看下一章節“吸液套件組的連接和操作使用",完成吸液套件的連接。
4.開機開始吸液,可以參看下一章節“吸液套件組的連接和操作使用",使用對應的吸頭適配器來吸液。。
5.注意觀察廢液瓶的液位,液位過高時應停止吸液,以免液體倒吸入泵。